Aula prática de Coloração de Gram

Coloração de Gram  é uma técnica de coloração para diferenciação das cores dos dois principais grupos de bactérias por microscopia óptica. A técnica recebeu este nome em homenagem ao médico dinamarquês Hans Cristian Joaquim Gram. Por volta de 1884, Hans Gram observou que as bactérias , após serem tratadas com diferentes corantes, adquiriram cores diferenciadas.  Assim, as que ficavam roxas foram classificadas de Gram-positivas, e as que ficavam vermelhas, foram chamadas de Gram-negativas.  Essa técnica é fundamental para a taxonomia e para a identificação das bactérias.

Procedimentos da coloração de Gram

1. Em uma lâmina, contendo esfregaço seco, cubra-o pingando gotas do corante cristal violeta e deixe agir por 60 segundos;
2.   Adicione água ao esfregaço, em cima do cristal violeta, cobrindo toda a lâmina.
3. Após cubra a lâmina com lugol mordente ou Iodo de Gram e deixe por 60 segundos;
4. Escorra todo o lugol  e lave em um filete de água corrente;
5. Aplique álcool etílico a 95%, ou acetona, para descorar a lâmina por 60 segundos;
6. Lave em um filete de água corrente;
7. Cubra toda a lâmina com safranina e deixe corar por aproximadamente 60 segundos;
8. Lave a lâmina em um filete de água;
9.  Deixe a lâmina secar ao ar livre;
10. Aplique uma gota de óleo de imersão sobre o esfregaço e observe no microscópico com objetiva de imersão (100 X).

Os resultados após a coloração de Gram permitem a diferenciação e classificação das bactérias em dois grupos:

As bactérias Gram-positivas, que têm a parede celular composta por mureína (peptídeoglicano – peptídeo de ácido n-acetil murâmico), durante o processo de descoloração com álcool etílico, retém o corante, permanecendo com a coloração conferida pelo corante primário (roxo).  Já as bactérias Gram-negativas com parede celular composta predominantemente por ácidos graxos (lipopolissacarídeos e lipoproteínas), perdem o complexo iodo-pararosanilina, são incapazes de reter o violeta de Genciana, assumindo a cor do corante de fundo (vermelha).
São as diferenças da estrutura da parede bacteriana, principalmente com relação à espessura da camada de peptidoglicano, que é  responsável pelo diferente comportamento das bactérias diante da coloração de Gram.

 Por Marina Martinez ( alterado por Daiane Teixeira)

Fotos de Aula Prática sobre Coloração de Gram

(Professor Gabriel Nascimento) 4º período de Ciências Biológicas IFTM

 

 Preparação e fixação das Lâminas 

 

4º período de Ciências Biológicas IFTM

Coloração de Gram 

 

Fotos Daiane Teixeira